7. Подготовка к определению

"МУК 4.1.3205-14. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств глюфосината аммония и его метаболита в клубнях картофеля методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 30.07.2014)

7. Подготовка к определению

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов N 1 и 2 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения веществ на концентрирующих патронах N 1 и 2, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетона

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцово-кислый калий из расчета 100 мг/дм3. Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

7.1.2. Очистка метанола

Метанол, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный углекислый калий из расчета не менее 100 г/дм3. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем метанол фильтруют через фильтр "красная лента" в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 аппарата для перегонки растворителей.

Метанол перегоняют при температуре 64,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 64,7 °C, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 см3 от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/дм3 и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 0,015 М раствора водного аммиака.

В мерную колбу вместимостью 1 000 см3 добавляют 500 см3 деионизированной воды и 10 см3 водного аммиака (содержит 28 - 30% NH3), перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.1.2. Приготовление 0,01 М раствора гидроокиси натрия.

В мерную колбу на 500 см3 переносят 0,2 г гидроксида натрия, добавляют 200 - 300 см3 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.3. Приготовление 40%-го водного раствора муравьиной кислоты

В мерную колбу объемом 1 000 см3 помещают 500 см3 очищенной воды, прибавляют 400 см3 муравьиной кислоты, перемешивают и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией деривата глюфосината аммония (IV) 100 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 13,9 мг метил-4-(метоксиметил)-фосфинил-2-ацетамидобутирата (IV, дериват глюфосината аммония), растворяют в 40 - 50 см3 метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Стандартный раствор N 1 хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией деривата метаболита глюфосината аммония (V) 100 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 10 мг метил-3-(метоксиметил)-фосфинил-пропионата (V, дериват метаболита), растворяют в 40 - 50 см3 метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Стандартный раствор N 2 хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 10,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 10 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 10 см3 и помещают в ту же колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки метилацетатом. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 3 хранят в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 2,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 1,0 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 0,4 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией дериватов глюфосината аммония и его метаболита по 0,2 мкг/см3 (в пересчете на эквивалент глюфосинат свободная кислота II).

Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 2 см3, помещают в мерную колбу объемом 10 см3 и доводят объем до метки метилацетатом при перемешивании. Стандартный раствор N 7 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.3. Приготовление растворов для хроматографического

исследования и внесения в контрольные образцы

7.2.3.1. Стандартный раствор A с концентрацией глюфосината аммония 1 мг/см3.

В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают 50,45 мг глюфосината аммония, добавляют 30 - 35 см3 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор A хранится в холодильнике не более одного месяца.

7.2.3.2. Стандартный раствор B с концентрацией 3-метилфосфино-пропионовой кислоты 1 мг/см3.

В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают 42 мг 3-метилфосфино-пропионовой кислоты, добавляют 30 - 35 см3 0,015 М раствора водного аммиака, перемешивают до полного растворения вещества и доводят объем до метки этим же растворителем. Раствор B хранится в холодильнике не более одного месяца.

7.2.3.3. Стандартный раствор C с концентрацией глюфосината аммония и его метаболита по 10,0 мкг/см3.

Из стандартного раствора A отбирают пипеткой 1 см3, помещают в мерную колбу объемом 100 см3. Из стандартного раствора B отбирают пипеткой 1 см3 и помещают в ту же колбу объемом 100 см3, доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор C используется для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы и хранится в холодильнике не более одного месяца.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации дериватов глюфосината аммония и его метаболита в растворе (мкг/см3), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,2; 0,4; 1,0; 2,0 мкг/см3.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Дериватизация

Из стандартного раствора C (п. 7.2.3.3), содержащего по 10 мкг/см3 глюфосината аммония и его метаболита, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

К сухому остатку в концентраторе приливают 3 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают содержимое и помещают, концентратор на 1 мин в ультразвуковую ванну. Затем в колбу добавляют 12 см3 триметилортоацетата и снова помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 4,5 ч. К охлажденной реакционной смеси добавляют три порции по 15 см3 каждая толуола и каждый раз выпаривают содержимое на ротационном вакуумном испарителе (для полного удаления реакционной смеси) при температуре не выше 40 °C до объема 1 - 2 см3. Содержимое концентратора переносят в мерную пробирку и доводят объем до 4 см3 толуолом. Пробу возвращают в концентратор объемом 100 см3, добавляют 4 см3 метилацетата, перемешивают содержимое и помещают концентратор в ультразвуковую ванну на 1 мин. Затем 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Примечание: При проведении дериватизации посуда и реактивы должны быть сухими.

7.5. Подготовка концентрирующих патронов N 2 для очистки

экстрактов и проверка хроматографического поведения

глюфосината аммония и его метаболита на них

7.5.1. Подготовка концентрирующих патронов N 2 для очистки

экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон N 2 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 0,01 М раствора гидроокиси натрия, 10 см3 воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения глюфосината

аммония и его метаболита на концентрирующих патронах N 2

Из стандартного раствора C (п. 7.2.3.3), содержащего 10 мкг/см3, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 20 см3 воды, тщательно обмывая стенки концентратора, выдерживают 1 - 2 мин в ультразвуковой ванне и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C. Патрон промывают четырьмя-пятью порциями по 10 см3 каждая 40%-го водного раствора муравьиной кислоты. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C.

Патрон промывают 20 см3 воды, элюат отбрасывают. Затем патрон промывают четырьмя-пятью порциями по 10 см3 каждая 0,015 М раствора водного аммиака. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °C.

Пробы подвергают дериватизации (п. 7.4) и анализируют на содержание дериватов глюфосината аммония и метаболита по п. 9.2.

Определяют фракции, содержащие дериваты глюфосината аммония и его метаболита, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах N 2 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

7.6. Подготовка концентрирующих патронов N 1 для очистки

экстрактов и проверка хроматографического поведения

дериватов глюфосината аммония и его метаболита на них

7.6.1. Подготовка концентрирующих патронов N 1

для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см3/мин (1 - 2 кап./с).

Патрон N 1 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см3 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 см3 смеси метилацетата с толуолом в соотношении 1:1, элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.6.2. Проверка хроматографического поведения дериватов

глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих

патронах N 1

Из стандартного раствора N 3 (п. 7.2.2.3), содержащего 10 мкг/см3, отбирают 0,5 см3, помещают в концентратор объемом 100 см3 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 4 см3 толуола, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 см3 метилацетата, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см3. Промывают патрон последовательно 5 см3 метилацетата, затем четырьмя-пятью порциями по 5 см3 каждая смеси метилацетата с метанолом в соотношении 1:1. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см3, упаривают до объема 0,5 - 1 см3 на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C.

Содержимое концентраторов переносят в мерную пробирку. Концентратор обмывают двумя порциями по 1,5 см3 метилацетата, смывы объединяют в пробирке. Доводят объем в пробирке до 5 см3 и 1 мм3 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие дериваты глюфосината аммония и его метаболита, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения дериватов глюфосината аммония и его метаболита на концентрирующих патронах N 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.