7.1. Определение количества аэробных мезофильных
микроорганизмов в пищевых продуктах
Определение общего микробного числа основано на способности микроорганизмов продуцировать внеклеточные ферменты. В состав питательной среды входит специфический субстрат, меченый 4-метилумбелифероном. Во время роста микроорганизмы выделяют в культуральную жидкость ферменты, которые расщепляют субстрат, в результате чего освобождается свободный 4-метилумбелиферон, обладающий флуоресцентной способностью. Количество продуктов реакции прямо пропорционально численности популяции микроорганизмов. Наличие флуоресцентного сигнала считывается и фиксируется в автоматическом режиме ридером. В зависимости от количества и объема положительных лунок, а также разведения производится подсчет общего числа микроорганизмов в исходном образце методом наиболее вероятного числа в автоматическом режиме.
Готовят необходимое количество флаконов со средой из расчета: один флакон на один образец. Флаконы выдерживают до достижения комнатной температуры.
Диспенсер со стерильной дистиллированной водой устанавливают на объем 3,9 см3 для получения рекомендуемого разведения 1:400. Удаляют воздух из трубок подачи жидкости и носика, сливают две первых порции растворителя.
Включают станцию пробоподготовки.
Следуя инструкциям программного обеспечения, вносят данные об образце (вручную с клавиатуры или с помощью сканера).
При помощи диспенсера для растворения среды 3,9 см3 стерильной дистиллированной воды асептически вносят во флакон со специальной питательной средой TVC или AC (для определения количества аэробных мезофильных микроорганизмов).
Из секции пакета, содержащей профильтрованный образец, отбирают 0,1 см3 стерильной пипеткой и переносят во флакон со средой. Содержимое флакона гомогенизируют в течение трех секунд на гомогенизаторе типа вортекс. Объем полученной суспензии должен составлять 4,0 см3.
Готовят одну карту для определения количества аэробных мезофильных микроорганизмов для каждого флакона с суспензией. Во избежание контаминации запрещается дотрагиваться до кончика транспортной трубочки. Цветовая маркировка карты и флакона должны совпадать.
Связывают номер образца со штрих-кодами соответствующих карты и флакона при помощи сканера для штрих-кодов станции пробоподготовки, следуя инструкциям программного обеспечения станции пробоподготовки.
Флакон с суспензией помещают в штатив для заполнения карт. Карту помещают в соответствующий слот и осторожно помещают транспортную трубочку во флакон со средой. Штатив рассчитан максимально на шесть флаконов и карт и позволяет одновременно заполнять 1 - 6 карт.
Штатив для заполнения карт помещают в вакуумную станцию для заполнения карт и начинают цикл заполнения. Суспензия из флакона полностью всасывается в карту. После заполнения транспортные трубочки срезаются, и карты запаиваются. Все операции в станции заполнения карт выполняются станцией автоматически и занимают несколько минут. Цикл заполнения одинаков для всех карт и всех разведений, что позволяет одновременно заполнять разные карты.
Штатив для заполнения карт удаляют из вакуумной станции и визуально проверяют полноту заполнения (флакон должен быть пуст). Карты вынимают из штатива для заполнения и выгружают в штатив для инкубации и считывания. Карты вставляют в слоты таким образом, чтобы штрих-код карты был обращен к ручке штатива. Каждый штатив рассчитан на 20 карт. Запрещается вставлять карты между слотами.
Карты инкубируют в термостате при температуре (30 +/- 1) °C в течение 24 - 48 ч или 40 - 48 ч в зависимости от типа продукта в соответствии с инструкцией производителя.
По окончании инкубации включают станцию учета результатов.
Штатив для инкубации и считывания с картами помещают в ридер. Ридер сканирует штрих-код каждой карты, считывает флуоресценцию в лунках и интерпретирует результат. В процессе считывания карты считываются последовательно одна за другой. Связывание образца с типом теста, разведением и полученными результатами происходит автоматически.
На экране станции учета результатов отображается результат в КОЕ/г (КОЕ/см3, КОЕ/мл) исходного продукта.
По окончании теста карты удаляются из штатива для инкубации и сбрасываются в контейнер для утилизации.
Примечания.
Для кислых продуктов: после приготовления суспензии доводят ее pH до нейтрального pH (pH = 7), (EN ISO 6887-4 п. 8.2).
Для продуктов, обладающих ингибиторными свойствами, таких как ароматические травы, специи, чаи, настои: степень разведения должна быть не менее 1:400 (EN ISO 6887-4 п. 9.5.4.4).
Рекомендовано разведение 1:400 (102 - 4,9 x 105 КОЕ/г). При других предполагаемых степенях контаминации продукта степень разведения необходимо менять (см. инструкцию производителя по применению наборов).