7.8. Подсчет дрожжевых и плесневых грибов в пищевых продуктах

"МУК 4.2.3261-15. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Определение количества микроорганизмов в пищевых продуктах и объектах окружающей среды методом наиболее вероятного числа с применением автоматического экспресс-анализатора. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 21.05.2015)

7.8. Подсчет дрожжевых и плесневых грибов в пищевых

продуктах

Определение количества дрожжевых и плесневых грибов основано на способности клеток утилизировать субстрат среды, что приводит к возникновению флуоресцентного сигнала, который улавливается ридером. В зависимости от количества и типа положительных лунок производится подсчет дрожжевых и плесневых грибов в исходном образце методом наиболее вероятного числа в автоматическом режиме.

Готовят необходимое количество флаконов со средой из расчета: один флакон на один образец. Флаконы выдерживают до достижения комнатной температуры.

Диспенсер со стерильной дистиллированной водой устанавливают на объем 3,0 см3 для получения рекомендованного разведения 1:40. Удаляют воздух из трубок подачи жидкости и носика, сливают две первых порции растворителя.

После этого включают станцию пробоподготовки.

Следуя инструкциям программного обеспечения, вносят данные об образце (вручную с клавиатуры или с помощью сканера).

При помощи диспенсера для растворения среды 3,0 см3 стерильной дистиллированной воды асептически вносят во флакон с питательной средой YM (для подсчета дрожжевых и плесневых грибов).

Из секции пакета, содержащей профильтрованный образец, отбирают 1,0 см3 стерильной пипеткой и переносят во флакон со средой. Содержимое флакона гомогенизируют в течение трех секунд на гомогенизаторе типа вортекс. Объем полученной суспензии должен составлять 4,0 см3.

Готовят одну карту для подсчета дрожжевых и плесневых грибов для каждого флакона с суспензией. Во избежание контаминации запрещается дотрагиваться до кончика транспортной трубочки. Цветовая маркировка карты и флакона должны совпадать.

Связывают номер образца со штрих-кодами соответствующих карты и флакона при помощи сканера для штрих-кодов станции пробоподготовки, следуя инструкциям программного обеспечения станции пробоподготовки.

Флакон с суспензией помещают в штатив для заполнения карт. Карту помещают в соответствующий слот и осторожно помещают транспортную трубочку во флакон со средой. Штатив рассчитан максимально на шесть флаконов и карт и позволяет одновременно заполнять 1 - 6 карт.

Штатив для заполнения карт помещают в вакуумную станцию для заполнения карт и начинают цикл заполнения. Суспензия из флакона полностью всасывается в карту. После заполнения транспортные трубочки срезаются, и карты запаиваются. Все операции в станции заполнения карт выполняются станцией автоматически и занимают три минуты. Цикл заполнения одинаков для всех карт и всех разведений, что позволяет одновременно заполнять разные карты.

Штатив для заполнения карт удаляют из вакуумной станции и визуально проверяют полноту заполнения (флакон должен быть пуст). Карты вынимают из штатива для заполнения и выгружают в штатив для инкубации и считывания. Карты вставляют в слоты таким образом, чтобы штрих-код карты был обращен к ручке штатива. Каждый штатив рассчитан на 20 карт. Запрещается вставлять карты между слотами.

Карты инкубируют в термостате при температуре (25 +/- 1) °C в течение 72 - 76 ч.

По окончании инкубации включают станцию учета результатов.

Штатив для инкубации и считывания с картами помещают в ридер. Ридер сканирует штрих-код каждой карты, считывает флуоресценцию в лунках и интерпретирует результат. В процессе считывания карты считываются последовательно одна за другой. Связывание образца с типом теста, разведением и полученными результатами происходит автоматически.

На экране станции учета результатов отображается результат в КОЕ/г или КОЕ/мл исходного продукта. Интерпретация результатов осуществляется путем логарифмирования.

По окончании теста карты удаляются из штатива для инкубации и сбрасываются в контейнер для утилизации.

Примечания.

Для кислых продуктов: после приготовления суспензии доводят ее pH до нейтрального (pH 7) (EN ISO 6887-4 п. 8.2).

Для продуктов, обладающих ингибиторными свойствами, таких как ароматические травы, специи, чаи, настои: степень разведения должна быть не менее 1:400 (EN ISO 6887-4 п. 9.5.4.4).

Рекомендовано разведение 1:40 (10 - 4,9 x 104 КОЕ/г). При других предполагаемых степенях контаминации продукта степень разведения необходимо менять (см. инструкцию производителя по применению наборов).