7.6. Подсчет Staphylococcus aureus в пищевых продуктах
Определение количества Staphylococcus aureus основано на способности микроорганизмов менять pH среды во время культивирования, что приводит к угасанию флуоресцентного сигнала, который улавливается ридером. В зависимости от количества и типа положительных лунок производится подсчет стафилококков в исходном образце методом наиболее вероятного числа в автоматическом режиме.
Готовят необходимое количество флаконов со средой из расчета: один флакон на один образец. Флаконы выдерживают до достижения комнатной температуры.
Диспенсер со стерильной дистиллированной водой устанавливают на объем 3,0 см3 для получения рекомендованного разведения 1:40. Удаляют воздух из трубок подачи жидкости и носика, сливают две первых порции растворителя.
После этого включают станцию пробоподготовки.
Следуя инструкциям программного обеспечения, вносят данные об образце (вручную с клавиатуры или с помощью сканера).
При помощи диспенсера для растворения среды 3,0 см3 стерильной дистиллированной воды асептически вносят во флакон с питательной средой STA (для подсчета Staphylococcus aureus).
Из секции пакета, содержащей профильтрованный образец, отбирают 1,0 см3 стерильной пипеткой и переносят во флакон со средой. Содержимое флакона гомогенизируют в течение трех секунд на гомогенизаторе типа вортекс. Объем полученной суспензии должен составлять 4,0 см3.
Готовят одну карту для подсчета Staphylococcus aureus для каждого флакона с суспензией. Во избежание контаминации запрещается дотрагиваться до кончика транспортной трубочки. Цветовая маркировка карты и флакона должны совпадать.
Связывают номер образца со штрих-кодами соответствующих карты и флакона при помощи сканера для штрих-кодов станции пробоподготовки, следуя инструкциям программного обеспечения станции пробоподготовки.
Флакон с суспензией помещают в штатив для заполнения карт. Карту помещают в соответствующий слот и осторожно помещают транспортную трубочку во флакон со средой. Штатив рассчитан максимально на шесть флаконов и карт и позволяет одновременно заполнять 1 - 6 карт.
Штатив для заполнения карт помещают в вакуумную станцию для заполнения карт и начинают цикл заполнения. Суспензия из флакона полностью всасывается в карту. После заполнения транспортные трубочки срезаются, и карты запаиваются. Все операции в станции заполнения карт выполняются станцией автоматически и занимают три минуты. Цикл заполнения одинаков для всех карт и всех разведений, что позволяет одновременно заполнять разные карты.
Штатив для заполнения карт удаляют из вакуумной станции и визуально проверяют полноту заполнения (флакон должен быть пуст). Карты вынимают из штатива для заполнения и выгружают в штатив для инкубации и считывания. Карты вставляют в слоты таким образом, чтобы штрих-код карты был обращен к ручке штатива. Каждый штатив рассчитан на 20 карт. Запрещается вставлять карты между слотами.
Карты инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 - 27 ч.
По окончании инкубации включают станцию учета результатов.
Штатив для инкубации и считывания с картами помещают в ридер. Ридер сканирует штрих-код каждой карты, считывает флуоресценцию в лунках и интерпретирует результат. В процессе считывания карты считываются последовательно одна за другой. Связывание образца с типом теста, разведением и полученными результатами происходит автоматически.
На экране станции учета результатов отображается результат в КОЕ/г (КОЕ/см3, КОЕ/мл) исходного продукта. Интерпретация результатов определения Staphylococcus aureus осуществляется в соответствии с рекомендациями и инструкцией производителя.
По окончании теста карты удаляются из штатива для инкубации и сбрасываются в контейнер для утилизации.
Примечания.
Для кислых продуктов: после приготовления суспензии доводят ее pH до нейтрального (pH 7) (EN ISO 6887-4 п. 8.2).
Для продуктов, обладающих ингибиторными свойствами, таких как ароматические травы, специи, чаи, настои: степень разведения должна быть не менее 1:400 (EN ISO 6887-4 п. 9.5.4.4).
Рекомендовано разведение 1:40 (10 - 4,9 x 104 КОЕ/г). При других предполагаемых степенях контаминации продукта степень разведения необходимо менять (см. инструкцию производителя по применению наборов).