8 Порядок выполнения анализа

"ГОСТ 34139-2017. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания седативных препаратов и адреноблокаторов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием" (введен в действие Приказом Росстандарта от 19.09.2017 N 1161-ст)

8 Порядок выполнения анализа

8.1 Условия хроматографического разделения

8.1.1 Масс-спектрометр и хроматограф включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры рабочих режимов масс-спектрометрического детектирования и хроматографического разделения.

8.1.2 Например, для колонки диаметром 2,1 мм, длиной 150 мм, с обращеннофазным сорбентом C18 с размером частиц не более 5,0 мкм, соблюдают следующие условия хроматографирования:

- температура колонки - 40 °C;

- скорость потока подвижной фазы - 0,25 см3/мин;

- объем вводимой пробы - 20 мм3.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление подвижных фаз А и Б по 6.2) в соответствии с таблицей 3.

Таблица 3

Условия градиентного элюирования при регистрации

положительных ионов

Время, мин

Подвижная фаза А, %

Подвижная фаза Б, %

0,0

95

5

1,0

95

5

20,0

5

95

20,1

95

5

30,0

95

5

8.1.3 Параметры режима ММР при измерении седативных препаратов и адреноблокаторов приведены в таблице 4.

Таблица 4

Параметры воздействия на ионы в режиме ММР с регистрацией

положительных ионов

Аналит

Ион-предшественник, m/z

Ион-продукт, m/z

Время удерживания, мин

Энергия соударений, эВ

Ускоряющее напряжение на выходе из ячейки столкновений, В

Азаперол

330,3

121,1

312,2

6,87

28

20

12

13

Пропионилпромазин

341,3

236,2

268,2

15,75

47

32

11

20

Галоперидол

376,2

165,1

123,2

13,90

31

55

11

11

Азаперон

328,3

121,1

165,2

8,01

25

27

12

11

Флуфеназин

438,2

143,2

171,2

16,85

38

34

9

12

Каразолол

299,2

116,2

222,2

11,64

27

26

10

10

Ацепромазин

327,2

86,0

254,3

14,6

23

31

14

16

Ксилазин

221,1

90,0

164,1

9,93

30

35

11

11

Трифлупромазин

353,2

58,2

280,1

16,61

68

32

7

13

Детомидин

187,3

81,0

54,2

11,66

25

51

11

8

Медетомидин

201,3

95,3

68,1

12,84

24

45

6

8

Хлорпромазин

319,2

58,0

246,1

16,15

83

30

11

17

Меперидин

248,2

103,2

220,3

11,11

50

30

8

14

Диазепам

285,0

154,2

193,1

17,77

36

46

15

15

Метопролол

268,2

116,2

191,2

10,49

25

23

18

13

Ромифидин

259,4

160,0

178,0

6,00

40

45

9

10

Промазин

284,6

180,1

212,1

11,16

52

30

10

15

Азаперол-Д4 <*>

334,3

153,2

6,80

37

10

Азаперон-Д4 <*>

332,3

127,2

7,94

50

17

Каразолол-Д7 <*>

306,1

123,0

11,61

24

10

<*> Внутренний стандарт.

Примечание - Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.

Параметры настройки масс-спектрометрического детектора:

- напряжение на распыляющем капилляре (IS) 5500 В при регистрации положительных ионов;

- температура источника 500 °C;

- разрешение квадруполей Q1/Q3 - единичное;

- поток газа для фрагментации (CAD) - 6 кПа.

8.1.4 Контроль чувствительности масс-спектрометра осуществляют введением в инжектор хроматографа 20 мм3 градуировочного раствора G6 (см. 6.3.3). Полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 10.

8.2 Построение градуировочной характеристики

Построение и расчет градуировочной характеристики проводят в каждой серии анализов с помощью программного обеспечения хромато-масс-спектрометра.

8.2.1 Проводят измерения не менее четырех матричных градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.3, в порядке возрастания их концентраций. Каждый градуировочный раствор измеряют два раза. Определяют значения времени удерживания ион-продуктов аналитов и их внутренних стандартов.

8.2.2 Вычисление площади пика проводят для каждого ион-продукта анализируемых аналитов и их внутренних стандартов. Количественное определение седативных препаратов и адреноблокаторов проводят по одному, наиболее интенсивному ион-продукту. Для подтверждения наличия седативных препаратов и адреноблокаторов рассчитывают отношения площади пика двух ион-продуктов для каждого аналита в градуировочном растворе.

8.2.3 Градуировочную характеристику строят в координатах "отношение площади пика определяемого соединения к площади пика внутреннего стандарта этого соединения" - "отношение концентраций аналита и внутреннего стандарта". При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию вида y = a + bx, при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0,98. Построение градуировочной характеристики проводят при каждой серии измерений заново.

Соответствие аналитов и их внутренних стандартов указано в таблице 1.

8.2.4 Построение линейного градуировочного графика и расчет концентрации седативных препаратов и адреноблокаторов в анализируемых пробах выполняется системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.3 ВЭЖХ-МС/МС-анализ

8.3.1 Для измерения содержания седативных препаратов и адреноблокаторов проводят ВЭЖХ-МС/МС-анализ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования. Для каждого аналита проводят два параллельных измерения.

8.3.2 Анализ выполняют в виде серии измерений, включающей следующие образцы:

- подвижную фазу А;

- "чистую" пробу;

- градуировочные растворы (см. 6.3.3);

- экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.3.3 Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пиков двух ион-продуктов каждого аналита, соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов по 8.1.3.