6 Подготовка к проведению измерений
6.1 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.1.1 Мойку и сушку посуды проводят в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.
6.1.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).
6.1.3 Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °C до 110 °C.
6.1.4 Каждую новую партию реактивов проверяют на отсутствие контаминации анализируемыми соединениями путем проведения холостого опыта в соответствии с процедурой анализа.
6.2.1 Приготовление подвижной фазы А
Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 600 см3 деионизированной воды, 5,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, доводят объем раствора деионизированной водой до метки на колбе и помещают в ультразвуковую баню в режиме дегазации на 5 мин.
Срок хранения раствора при температуре от 15 °C до 25 °C - не более 2 мес.
6.2.2 Приготовление подвижной фазы Б
Для приготовления подвижной фазы Б в мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 600 см3 метанола, 5,0 см3 муравьиной кислоты, перемешивают, доводят объем раствора метанолом до метки на колбе и помещают в ультразвуковую баню в режиме дегазации на 5 мин.
Срок хранения раствора при температуре от 15 °C до 25 °C - не более 1 мес.
6.3 Приготовление градуировочных растворов
6.3.1 Приготовление исходных стандартных растворов седативных препаратов и адреноблокаторов (азаперон, азаперол, промазин, детомидин, метопролол, каразолол, ксилазин, галоперидол, ацепромазин, хлорпромазин, пропионилпромазин, трифлупромазин, диазепам, медетомидин, меперидин, ромифидин и флуфеназин) (растворы C0) и исходных растворов внутренних стандартов (каразолол-Д7, азаперон-Д4, азаперол-Д4) (растворы D0) с массовыми концентрациями 200 мкг/см3
6.3.1.1 Внутренние стандарты для седативных препаратов и адреноблокаторов выбирают в соответствии с таблицей 1.
Таблица 1
Соответствие между аналитами и внутренними стандартами
Наименование аналита | Наименование внутреннего стандарта |
Азаперол | Азаперол-Д4 |
Диазепам | |
Азаперон | Азаперон-Д4 |
Ромифидин | |
Ацепромазин | Каразолол-Д7 |
Галоперидол | |
Детомидин | |
Каразолол | |
Ксилазин | |
Медетомидин | |
Метопролол | |
Меперидин | |
Промазин | |
Пропионилпромазин | |
Трифлупромазин | |
Флуфеназин | |
Хлорпромазин |
6.3.1.2 Для приготовления исходных стандартных растворов C0 и D0 рассчитывают необходимую массу i-го вещества, эквивалентную 5,0 мг с учетом содержания основного вещества для каждого определяемого аналита и внутреннего стандарта, по формуле
(1)
где C - концентрация i-го аналита в стандартном растворе, мкг/см3;
V - объем мерной колбы, см3;
Pi - массовая доля основного вещества в i-м стандартном образце, %;
Mi - молярная масса основного вещества в i-м стандартном образце, г/моль;
Mаналита i - молярная масса i-го аналита, г/моль.
В мерные колбы вместимостью 25 см3 по отдельности вносят рассчитанные массы исходных веществ (взвешивание проводят с точностью до первого десятичного знака). Приливают по 15 см3 метанола, закрывают пробками, перемешивают и после полного растворения сухого вещества доводят объем растворов метанолом до метки на колбе. Помещают в ультразвуковую баню на 5 мин в режиме перемешивания.
Срок хранения растворов при температуре от минус 15 °C до минус 25 °C - не более одного года.
Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.
6.3.2 Приготовление рабочих стандартных растворов седативных препаратов и адреноблокаторов (растворы C1 - C3) и их внутренних стандартов (растворы D1, D2)
Рабочие растворы C1 - C3, D1, D2 готовят в мерных пробирках вместимостью 10 см3 в соответствии с рисунком 1.
Рисунок 1 - Приготовление рабочих растворов C1 - C3, D1, D2
Растворы хранят при температуре от минус 15 °C до минус 25 °C. Срок хранения растворов C1, D1 - не более 6 мес, C2, D2 - не более 3 мес, C3 - не более одной недели.
Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.
6.3.3 Приготовление матричных градуировочных растворов (растворы G1 - G6)
Матричные градуировочные растворы G1 - G6 готовят в виалах или полипропиленовых пробирках вместимостью 15 см3 из "чистых" проб массой 1,0 г, в которые вносят рабочий раствор внутренних стандартов D2 и рабочие растворы определяемых аналитов C1, C2, C3 в соответствии с таблицей 2.
Таблица 2
Приготовление матричных градуировочных растворов G1 - G6
Обозначение и массовая концентрация матричного градуировочного раствора | Вносимый объем рабочего раствора, см3 | |||
C1 | C2 | C3 | D2 | |
G1 (500 нг/см3) | 0,25 | - | - | 0,05 |
G2 (100 нг/см3) | - | 0,1 | - | 0,05 |
G3 (50 нг/см3) | - | 0,05 | - | 0,05 |
G4 (10 нг/см3) | - | - | 0,1 | 0,05 |
G5 (5 нг/см3) | - | - | 0,05 | 0,05 |
G6 (1 нг/см3) | - | - | 0,01 | 0,05 |
Пробирки встряхивают в шейкере в течение 1 - 2 мин, выдерживают в темноте при комнатной температуре в течение 10 мин и проводят дальнейшую обработку растворов согласно разделу 7.
Срок хранения растворов G1 - G6 при температуре от 2 °C до 8 °C - не более суток.